豬ELISA檢測(cè)試劑盒的關(guān)鍵技術(shù)參數(shù)包括板內(nèi)差異、板間差異、批間差異、重復(fù)性、特異性、散布反應(yīng)、回收率等。如果經(jīng)常進(jìn)行ELISA檢測(cè)，建議使用同一個(gè)試劑盒。制造商，以盡可能保證數(shù)據(jù)的可重復(fù)性（當(dāng)然，條件是測(cè)試條件的一致性）。至于用于科研的ELISA試劑盒，不同廠家使用的抗體對(duì)、酶和底物、生產(chǎn)技術(shù)和開發(fā)實(shí)力不同，不同廠家的試劑盒測(cè)得的數(shù)據(jù)也會(huì)不同。
實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作：
1、準(zhǔn)備好所有實(shí)驗(yàn)額外所需物品，如試管 吸頭 移液器 離心機(jī)等。
2、確定試劑盒在有效期內(nèi)。
3、仔細(xì)閱讀說明書。
4、按說明書確定所有試劑齊全（數(shù)量 體積）。
5、標(biāo)本制備要規(guī)范，每份標(biāo)本體積要按2-3個(gè)復(fù)孔以上的量制備（貯存），盡量分裝做備份。
6、根據(jù)檢測(cè)標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量。
7、按說明書將所用試劑盒平衡至室溫，配制所需試劑。
豬ELISA試劑盒的樣本處理及要求：
1、血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4℃過夜，然后1000×g離心20分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2、血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3、組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測(cè)。
4、細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：請(qǐng)1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
在線客服
電話咨詢
